Тромбоцитарная плазма (PRP) и тромбоцитарный лизат (PL) являются важнейшими продуктами регенеративной медицины благодаря высокой концентрации факторов роста, цитокинов и других биоактивных молекул. Однако если для человеческой PRP оптимальное количество циклов заморозки-разморозки (необходимых для активации и высвобождения факторов роста) уже установлено, то для собак этот параметр до настоящего времени оставался неизученным.
Исследователи из Frontiers in Veterinary Science провели оценку влияния многократных циклов заморозки-разморозки на концентрацию тромбоцитов и ключевых биоактивных компонентов в коммерчески доступном препарате тромбоцитарной плазмы собак.
Методология и ход исследования
Авторы исследования выбрали для анализа шесть флаконов коммерческого препарата PRP для собак из трех различных производственных партий. Каждый флакон восстанавливали согласно инструкциям производителя и хранили при -80°C в течение 12-24 часов.
Образцы размораживали в сухой бане при 37°C. Дополнительные циклы заморозки-разморозки проводились с использованием жидкого азота, с последующим размораживанием при 37°C для образцов, проходящих 3, 4, 5 и 10 циклов.
Ключевые параметры оценки:
- Количество тромбоцитов (до заморозки и после каждого цикла)
- Концентрации тромбоцитарного фактора роста (PDGF)
- Концентрации трансформирующего фактора роста-бета (TGF-β)
- Концентрации фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α)
Исследователи выдвинули две гипотезы:
- Значительная часть тромбоцитов будет лизирована к четвертому циклу заморозки-разморозки
- Концентрации факторов роста будут снижаться, в то время как концентрации TNF-α будут увеличиваться к 10-му циклу заморозки-разморозки
Результаты и клинические выводы
Исследование принесло несколько важных результатов для ветеринарной регенеративной медицины:
-
Лизис тромбоцитов: Авторы зафиксировали статистически значимое снижение количества тромбоцитов после 4, 5 и 10 циклов заморозки-разморозки по сравнению с исходными значениями PRP. Это подтвердило первую гипотезу исследователей.
-
Сохранность факторов роста: Вторая гипотеза была опровергнута - концентрации PDGF, TGF-β и TNF-α в значительной степени сохранялись на протяжении всех циклов заморозки-разморозки, хотя наблюдалась значительная вариабельность между образцами.
Наиболее ценный вывод исследования для практикующих ветеринаров состоит в том, что 4-5 циклов заморозки-разморозки эффективно лизируют тромбоциты, при этом сохраняя концентрации PDGF и TGF-β как минимум до 10 циклов.
Авторы исследования отмечают значительную вариабельность в содержании факторов роста и цитокинов даже в коммерчески доступном продукте, что указывает на необходимость дальнейших исследований для оптимизации активации PRP, предназначенной для клинического терапевтического применения.
Данное исследование представляет ценность для ветеринарных врачей, работающих с регенеративными методиками лечения собак, так как предлагает конкретные параметры обработки PRP для максимальной сохранности биологически активных компонентов.