Ключевые результаты
Исследователи разработали и валидировали два новых метода количественной ПЦР в реальном времени (qPCR) с анализом кривых плавления высокого разрешения (HRM) для обнаружения и дифференциации парвовирусов плотоядных. Первый метод позволяет отличать вирус панлейкопении кошек (FPV) от собачьего парвовируса (CPV-2) и его антигенных вариантов, второй предназначен для выявления "азиатскоподобных" (Asian-like) штаммов CPV.
В ходе генетической характеризации 33 образцов от собак и кошек с парвовирусной инфекцией из ветеринарной клиники Северной Италии (2017-2023 гг.) исследователи обнаружили:
- 33,3% — FPV (только у кошек)
- 6,1% — оригинальный CPV-2
- 6,1% — CPV-2a
- 21,2% — CPV-2b
- 33,3% — CPV-2c
Примечательно, что 45,4% выявленных CPV имели аминокислотные последовательности, характерные для "азиатскоподобных" штаммов, что предполагает их первоначальный импорт с последующим локальным распространением.
Методология
Разработаны два теста qPCR с HRM-анализом:
- Тест для дифференциации FPV, оригинального CPV-2 и его антигенных вариантов
- Тест для идентификации "азиатскоподобных" штаммов CPV
Для генетической характеризации изолятов проведено секвенирование гена VP2. Классификация вариантов осуществлялась на основе специфических аминокислотных остатков белка VP2, что позволило определить принадлежность к FPV или различным вариантам CPV (2, 2a, 2b и 2c).
Штаммы FPV, выявленные исключительно у кошек, показали высокую степень аминокислотного сходства, что подтверждает их эволюционную стабильность. В отличие от них, варианты CPV-2a, 2b и 2c демонстрировали более значительную генетическую гетерогенность, предполагающую их автохтонное происхождение.
Клиническое значение
Высокая изменчивость собачьего парвовируса может негативно влиять на достоверность молекулярно-диагностических тестов, потенциально приводя к ложноотрицательным результатам или задержкам в постановке диагноза. Современные вакцины против CPV в основном производятся на основе оригинального антигенного типа CPV-2, в то время как в полевых условиях циркулируют преимущественно варианты CPV-2a, 2b и 2c.
Разработанные тесты qPCR-HRM предлагают следующие преимущества:
- Сокращение времени выполнения анализа
- Упрощение диагностического процесса
- Возможность дифференциации видов и вариантов вирусов без необходимости секвенирования
Распространение "азиатскоподобных" штаммов CPV в Северной Италии (45,4% от всех выявленных CPV) подчеркивает важность эпидемиологического мониторинга и адаптации диагностических методов к циркулирующим вариантам.
Выводы
Разработанные методы qPCR с HRM-анализом успешно обнаруживали и классифицировали все тестируемые FPV и CPV, что подтверждает их надежность и полезность как для диагностических, так и для эпидемиологических целей. Исследование также показывает, что вирус панлейкопении кошек (FPV) сохраняет высокую генетическую стабильность, тогда как собачий парвовирус (CPV) продолжает эволюционировать.
Значительная доля "азиатскоподобных" штаммов CPV в исследуемой популяции указывает на их успешное распространение в Северной Италии после первоначального импорта. Полученные результаты подчеркивают важность постоянного обновления диагностических инструментов для отслеживания эволюции парвовирусов и обеспечения точной диагностики.